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使用紫外-可见光谱仪测量尿酸浓度
神科仪购网/SNKOO-eGo / 2018-10-12

痛风是一种常见疾病,由于人体尿酸水平异常产生微晶,从而导致人体关节收到伤害并且微晶不易溶解在人体血液中,除了减慢身体运动外,它们还可能引起人体关节剧烈疼痛和肿胀基于分子结构和对紫外光辐射的特殊化学特性,可以在紫外波段检测尿酸化合物。因此本文使用紫外-可见光谱仪(UV-Vis spectrometer)测量包含有微晶的人造尿酸的浓度和吸收截面,并与从人体血清中提取的尿酸作对比。将粉末形式尿酸样品用蒸馏水溶解转化为液体形式,从尿酸原料开始,基于摩尔浓度公式计算将其连续稀释至其他三种浓度。样品仍然含有未完全溶解在蒸馏水中的粗粒或尿酸悬浮颗粒,可以假设为人造微晶,以模仿由痛风病形成的真实微晶。

使用氘光源将光谱仪(UV-VIS Maya 2000 Pro,Ocean Optics)设置为UV波长区域。准备若干塑料比色皿,用于放置尿酸样品。将100mg尿酸粉末溶解在15mL蒸馏水中来制备尿酸原液(1.0mg/ml)。将该混合物在热板上加热至60℃,并用热板上的磁力搅拌器搅拌,之后冷却至20-26˚C。向混合物中加入85mL蒸馏水至100mL,制备尿酸原液。把原液稀释成三种不同的浓度:0.8mg/ml,0.6mg/ml和0.4mg/mL,分别放置于比色皿中。

图1显示了用于检测尿酸的完整实验装置,光谱仪通过USB连接至电脑。光纤从氘光源连接到比色皿支架的内部端口,再从比色皿支架的外部端口连接到光谱仪。在开始实验之前,将氘光源加热20秒左右。调整光谱仪积分时间。

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图 1

尿酸的吸收和浓度的计算基于Beer的Lambert Law公式,如公式1.0所示。将透射和入射光强代入该等式,可以利用标准方程并导出方程1.1,计算吸收截面的值。

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其中,A为吸光度。ɛ为摩尔吸光系数,与实验样品的化学特性有关的常数。C为尿酸样品浓度。ɭ为路径长度。Io为入射光强度。It为透射光强度。N为分子浓度(cm3

通过分析尿酸化合物的紫外光吸收度来进行尿酸检测。不同浓度的尿酸在同一波长下具有不同的吸光度值。根据已有研究结果,最大吸收在293.99nm处获得。图2显示了在相同波长下四种浓度的尿酸的初始结果曲线。

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图 2不同浓度尿酸吸光度曲线

通过该吸光度曲线可以看出,浓度为1mg/mL的尿酸原液具有最大吸光度,之后依次分别是其他三种浓度:0.8mg/ml,0.6mg/mL和0.4mg/mL。实验成功地证明了光谱仪能够在紫外波段检测出不同浓度的尿酸。图3显示了使用平均方法(三点间隔)产生的新信号,该曲线减少了噪音,更为平滑。

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图 3

来自<UV Detection on Artificial Uric Acid Using UV-Vis Spectrometer>

 


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